一、癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞的異質(zhì)性如何影響腫瘤免疫？

癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞是腫瘤微環(huán)境中數(shù)量豐富的間質(zhì)細(xì)胞之一，其來源多樣且功能異質(zhì)。部分CAFs來源于骨髓基質(zhì)細(xì)胞，但不同亞群在調(diào)控腫瘤進(jìn)展與免疫應(yīng)答中可能發(fā)揮截然相反的作用，其具體機(jī)制尚不清晰。同時，腫瘤浸潤中性粒細(xì)胞作為先天性免疫細(xì)胞，其功能同樣具有可塑性，在不同微環(huán)境信號下可極化為具有抗腫瘤活性的N1表型或促腫瘤的N2表型。闡明特定CAFs亞群如何招募并調(diào)控中性粒細(xì)胞的功能表型，對于理解腫瘤免疫的復(fù)雜性及開發(fā)新的治療策略至關(guān)重要。在這類精細(xì)的細(xì)胞亞群功能研究中，高特異性的細(xì)胞標(biāo)志物抗體是重要的工具。其中，小鼠Ly6G單克隆抗體作為識別中性粒細(xì)胞的關(guān)鍵表面標(biāo)志物，在研究其募集、功能及與基質(zhì)細(xì)胞互作機(jī)制中扮演了核心角色。

二、骨髓基質(zhì)細(xì)胞如何抑制腫瘤生長？

為探究成纖維細(xì)胞的異質(zhì)性功能，研究以骨髓基質(zhì)細(xì)胞為模型，與黑色素瘤或乳腺癌細(xì)胞按特定比例共注射至小鼠體內(nèi)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)基質(zhì)細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞比例為1:0.1時，能顯著抑制腫瘤生長。重要的是，這種抑制作用在T細(xì)胞缺陷的小鼠模型中依然存在，提示其機(jī)制不依賴于適應(yīng)性免疫，而可能涉及先天性免疫成分。進(jìn)一步通過遺傳學(xué)手段，研究人員發(fā)現(xiàn)僅由表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子Osterix的基質(zhì)細(xì)胞亞群所分泌的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白纖連蛋白，是產(chǎn)生抑制效應(yīng)的關(guān)鍵。特異性敲除該亞群的纖連蛋白基因，會導(dǎo)致基質(zhì)細(xì)胞的抗腫瘤作用消失。更為精細(xì)的細(xì)胞分選鑒定出一個核心的抑制性基質(zhì)細(xì)胞亞群，其特征為CD31與CD105雙重陰性。臨床數(shù)據(jù)分析也支持這一發(fā)現(xiàn)，在黑色素瘤患者中，腫瘤組織低表達(dá)CD105與更長的生存期顯著相關(guān)。

三、小鼠Ly6G單克隆抗體在機(jī)制解析中有何關(guān)鍵應(yīng)用？

為探究上述抑制效應(yīng)的具體免疫機(jī)制，研究廣泛使用了小鼠Ly6G單克隆抗體。該抗體的應(yīng)用貫穿了從表型鑒定到功能驗證的多個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。首先，通過流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合Ly6G抗體，研究人員可以精確量化腫瘤組織中浸潤的中性粒細(xì)胞比例。分析發(fā)現(xiàn)，在共注射了抑制性骨髓基質(zhì)細(xì)胞的小鼠腫瘤內(nèi)，Ly6G陽性中性粒細(xì)胞的比例顯著升高，且其豐度與腫瘤重量呈負(fù)相關(guān)，提示其可能參與介導(dǎo)了腫瘤抑制。其次，為了直接驗證中性粒細(xì)胞的功能必要性，研究采用了基于Ly6G單克隆抗體的體內(nèi)細(xì)胞耗竭策略。通過向小鼠注射抗Ly6G抗體，特異性、暫時性地清除體內(nèi)的中性粒細(xì)胞。實驗結(jié)果顯示，耗竭Ly6G陽性細(xì)胞后，骨髓基質(zhì)細(xì)胞或纖連蛋白衍生物CS1肽段介導(dǎo)的腫瘤生長抑制效應(yīng)消失。這一關(guān)鍵的"功能挽救"實驗，直接證明了Ly6G陽性中性粒細(xì)胞是該抑制通路中重要的效應(yīng)細(xì)胞。

四、纖連蛋白如何通過信號通路招募功能性中性粒細(xì)胞？

機(jī)制研究進(jìn)一步揭示了從基質(zhì)細(xì)胞到中性粒細(xì)胞的信號傳導(dǎo)鏈條。纖連蛋白或其活性片段CS1，并非直接作用于中性粒細(xì)胞，而是首先作用于基質(zhì)細(xì)胞本身。CS1通過同時激活基質(zhì)細(xì)胞表面的整合素α5β1和Toll樣受體4，啟動下游信號。其中，TLR4的激活至關(guān)重要，它進(jìn)而活化核因子κB信號通路，誘導(dǎo)基質(zhì)細(xì)胞大量表達(dá)并分泌趨化因子CXCL1和CXCL2。這兩種趨化因子是已知的、高效的中性粒細(xì)胞趨化劑。因此，被CS1"激活"的基質(zhì)細(xì)胞通過分泌CXCL1/CXCL2，在腫瘤局部建立一個化學(xué)梯度，從而主動募集Ly6G陽性中性粒細(xì)胞向腫瘤部位聚集。體外實驗證實，經(jīng)CS1預(yù)處理的基質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基，能夠顯著促進(jìn)中性粒細(xì)胞的遷移。使用TLR4特異性抑制劑處理，可以阻斷CS1誘導(dǎo)的NF-κB活化、趨化因子表達(dá)上調(diào)、中性粒細(xì)胞募集以及最終的腫瘤抑制效應(yīng)，從而完整地驗證了這一信號軸。

五、該發(fā)現(xiàn)對腫瘤免疫治療有何啟示？

此項研究具有多方面的理論和臨床意義。首先，它挑戰(zhàn)了纖連蛋白在腫瘤微環(huán)境中主要起促癌作用的傳統(tǒng)觀點，揭示了其功能的高度環(huán)境依賴性：在骨髓來源的特定基質(zhì)細(xì)胞亞群背景下，纖連蛋白可通過TLR4信號發(fā)揮強(qiáng)大的抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)作用。其次，研究明確了在特定微環(huán)境信號（如源于基質(zhì)細(xì)胞的CS1-TLR4軸）驅(qū)動下，被募集的中性粒細(xì)胞可表現(xiàn)出顯著的抗腫瘤功能，為理解中性粒細(xì)胞的可塑性提供了新范例。再者，CD105作為基質(zhì)細(xì)胞的一個表面標(biāo)志物，其表達(dá)水平被證明與黑色素瘤患者預(yù)后相關(guān)，這為患者分層提供了潛在的生物標(biāo)志物。

六、提供小鼠Ly6G單克隆抗體的廠商有哪些？

杭州斯達(dá)特生物科技有限公司自主研發(fā)的"Invivo Anti-mouse Ly6G monoclonal Antibody"（貨號：S0B1198），是一款專為體內(nèi)實驗設(shè)計、具有高純度、高活性及優(yōu)異體內(nèi)安全性的功能性小鼠Ly6G單克隆抗體。本品采用符合體內(nèi)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的嚴(yán)格生產(chǎn)工藝，能夠高效、特異地識別并耗竭小鼠中性粒細(xì)胞（表達(dá)Ly6G），是研究中性粒細(xì)胞在免疫、炎癥及腫瘤微環(huán)境中功能的強(qiáng)大體內(nèi)工具。

杭州斯達(dá)特是優(yōu)寧維旗下品牌，志在為全球生命科學(xué)行業(yè)提供優(yōu)質(zhì)的抗體、蛋白、試劑盒等產(chǎn)品及研發(fā)服務(wù)。依托多個開發(fā)平臺：重組兔單抗、重組鼠單抗、快速鼠單抗、重組蛋白開發(fā)平臺（E.coli,CHO,HEK293,InsectCells）、一步法ELISA平臺，PTM泛修飾抗體平臺，已正式通過歐盟98/79/EC認(rèn)證、ISO9001認(rèn)證、ISO13485認(rèn)證。

小鼠Ly6G單克隆抗體如何揭示骨髓基質(zhì)細(xì)胞抑制腫瘤的新機(jī)制？